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HPLC常見(jiàn)峰形及異常情況

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HPLC常見(jiàn)峰形及異常情況

發(fā)布日期:2020-08-22 作者: 點(diǎn)擊:

  一、HPLC全稱高效液相色譜(HighPerformanceLiquidChromatography),是一種快速的分離分析技術(shù)。HPLC具有高效、高速、高靈敏度、適用范圍廣和流動(dòng)相選擇范圍廣等特點(diǎn),因而發(fā)展迅速,并在醫(yī)藥、食品、化妝品和農(nóng)藥等很多行業(yè)有著廣泛的應(yīng)用。


  二、HPLC峰形


  HPLC分析過(guò)程中,由于各種原因,經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一些異常峰形,嚴(yán)重影響對(duì)結(jié)果的分析,給實(shí)驗(yàn)人員帶來(lái)很大的困擾。下面介紹一些常見(jiàn)的峰形以及可能的原因:


  1.未出峰


  可能的原因:


  a.未成功進(jìn)樣,或樣品未溶解進(jìn)溶劑中,或樣品分解變質(zhì)或樣品濃度太低;


  b.儀器本身的問(wèn)題:泵或者檢測(cè)器故障;


  c.流動(dòng)相選擇不合適,如對(duì)于反相硅膠柱來(lái)說(shuō),若流動(dòng)相極性太大,是沖不下來(lái)一些小極性的物質(zhì)的,物質(zhì)一直保留在柱子中,因而不出峰。


  d.檢測(cè)器不合適,如:有些產(chǎn)品沒(méi)有紫外吸收或者吸收很弱,但是檢測(cè)還使用了UV檢測(cè)器

HPLC常見(jiàn)峰形及異常情況


       2.平頭峰


  可能的原因:


  a.樣品濃度過(guò)大或進(jìn)樣體積太大,這個(gè)也是大多數(shù)原因


  b.檢測(cè)器設(shè)置不正確


  3.可能的原因:


  a.流動(dòng)相吸收本底值過(guò)高


  b.進(jìn)樣過(guò)程中進(jìn)入空氣


  c.樣品組分的吸收低于流動(dòng)相


  d.配制樣品的溶劑與流動(dòng)相不一致


       4.肩峰


  可能的原因:


  a.進(jìn)樣量過(guò)大;樣品濃度過(guò)高


  b.保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞


  c.保護(hù)拄或色譜柱污染或失效


  d.色譜柱柱頭塌陷


  5.裂峰


  可能的原因:


  a.溶劑效應(yīng):溶解樣品用的溶劑和起始流動(dòng)相極性相差太大


  b.保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞


  c.保護(hù)拄或色譜柱污染或失效


  d.色譜柱柱頭塌陷


  6.鬼峰


  鬼峰(ghostpeak)是在某個(gè)譜圖里出現(xiàn),可能同樣的條件再做一次又不出現(xiàn)了,時(shí)有時(shí)無(wú)的峰。


  可能的原因:


  a.進(jìn)樣閥殘余峰,在每次進(jìn)完樣后用充足的時(shí)間來(lái)平衡和清洗系統(tǒng)


  b.樣品中存在未知物,改進(jìn)樣品的預(yù)處理


  c.流動(dòng)相污染,更換新流動(dòng)相(或者換品牌);盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用,隔夜的流動(dòng)相再次使用時(shí)要過(guò)濾


  d.流路中有小的氣泡,打開Purge閥,加大流速排除


       7.前伸峰


  可能的原因:


  a.進(jìn)樣量或樣品濃度高


  b.溶解樣品的溶劑比流動(dòng)相極性強(qiáng)


  c.保護(hù)拄或色譜柱污染或失效


  d.流動(dòng)相不合適,更換新流動(dòng)相(調(diào)pH或換種類、比例等)


  8.拖尾峰


  可能的原因:


  a.進(jìn)樣量或樣品濃度高


  b.流動(dòng)相不合適,更換新流動(dòng)相(調(diào)pH或換種類、比例等)


  c.硅羥基作用:加入三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相pH值,鈍化樣品


  d.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效:更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過(guò)濾器,過(guò)濾樣品


  e.色譜柱柱頭塌陷或柱效下降:更換色譜柱


  注:除以上異常峰形外,HPLC檢測(cè)過(guò)程中,還有很多其它情況,可以從儀器本身、流動(dòng)相、固定相(色譜柱)、柱溫和等度與梯度方法學(xué)等方面,調(diào)整參數(shù),最終找到一種最合適的HPLC方法。


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